ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится?
Один из наиболее передовых и точных способов проведения диагностики - это метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Нобелевскую премию за создание данного метода получил Кэри Муллис в 1993 году. Благодаря этому уникальному лабораторному методу диагностики можно обнаружить различные заболевания еще на стадии их зачатия. В данной статье вы узнаете, как проводится ПЦР-диагностика, когда его назначают для исследования и как необходимо готовиться к данному анализу.
Метод ПЦР, основанный на принципах молекулярной биологии, широко используется в диагностике многих заболеваний. Суть этого подхода заключается в использовании специальных ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в биологических пробах, например в крови.После этого специалисты лаборатории проводят анализ полученных фрагментов, сверяя их со специальной базой данных. Это позволяет выявить тип возбудителя болезни и определить его концентрацию в биоматериале.
Для проведения ПЦР-диагностики используется амплификатор - специальное устройство, которое нагревает и охлаждает пробирки с биологическим материалом. Нагревание и охлаждение необходимы для проведения репликации. При этом точность температурного режима оказывает существенное влияние на точность результата.
Какие сферы применения у метода ПЦР?
Метод ПЦР, или полимеразной цепной реакции, имеет широкий спектр применения в медицине. Он позволяет выявлять различные инфекции и используется для диагностики ВИЧ, герпеса, половых инфекций, кандидоза, гепатитов, мононуклеоза, листериоза, цитомегаловируса, туберкулеза, вируса папилломы человека и клещевого энцефалита [3, 4]. Метод ПЦР также применяется для диагностики вирусных заболеваний, включая коронавирусную инфекцию COVID-19, что особенно актуально в условиях сложной эпидемиологической обстановки.
Кроме того, метод ПЦР используется в криминалистике при необходимости определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. Он может использоваться также для установления отцовства [1, 2]. Таким образом, метод ПЦР находит свое применение в различных сферах, включая медицину и криминалистику.
Список литературы:
- Измерова, Т. В. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
- Полимеразная цепная реакция (PCR). Справочник по биологии
- Рындак, А. В. ПЦР диагностика (Полимеразная цепная реакция)
- PCR (polymerase chain reaction). Healthdirect
Плюсы и минусы ПЦР-диагностики
Диагностика методом ПЦР имеет ряд преимуществ, которые максимально использованы современной медициной. Одним из самых значительных достоинств является высокая чувствительность метода. Даже если в организме находится лишь несколько молекул ДНК возбудителя болезни, ПЦР-анализ позволяет выявить его на очень ранней стадии заболевания. Также метод эффективен при латентных формах болезни, когда она не проявляется вовсе.
ПЦР-анализ может быть проведен на любом биоматериале: на крови, слюне или клетках кожи, что делает его универсальным методом. Кроме того, одновременно можно исследовать несколько возбудителей болезни, что существенно расширяет возможности метода. Результат анализа готов уже через несколько часов, что делает метод быстрым и удобным для пациентов.
Проблемы при использовании ПЦР-диагностики связаны с высокими требованиями к технологии и профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат, что необходимо учитывать при его проведении. Это недостаток метода, который может быть преодолен соответствующими системами контроля качества работы лаборатории. В целом ПЦР-диагностика является точным и эффективным методом исследования, который успешно применяется в современной медицине.
Изучаемый материал для ПЦР-диагностики заболеваний может быть различным, и выбор зависит от типа инфекции. Например, при анализе на ЗППП методом ПЦР используют соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для обнаружения герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ, необходима кровь. Мазок из зева используется для анализа на мононуклеоз и цитомегаловирус. В случае поражений нервной системы, спинномозговая жидкость является подходящим материалом для анализа. Ткани плаценты изучаются для выявления внутриутробных инфекций, а для обнаружения легочных инфекций используют мокроту или плевральную жидкость.Ключевым фактором для подготовки к ПЦР-диагностике является тип биоматериала. Для анализа крови необходимо сдавать ее натощак утром. Что касается мочи, то ее также необходимо собрать утром в стерильный контейнер и сдать в лабораторию в ближайшие два часа.
При получении мазков или сосков из урогенитальной области, не следует вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, а также проводить спринцевания. Кроме того, мазки или соскобы не рекомендуется собирать во время менструации.
Пациенты, принимающие лекарственные препараты или БАД, обязательно должны сообщать о принимаемых препаратах врачу, так как действующие вещества могут исказить результаты лабораторного анализа. Возможно, придется остановить курс приема, чтобы получить предельно точный результат исследования.
Существует множество методов ПЦР-диагностики различных заболеваний. К ним относятся, например, ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. На данный момент наиболее распространенным является проведение анализа с помощью ПЦР в реальном времени, который практически исключает возможность ложноположительных результатов. Кроме того, обработка образцов при использовании этого метода значительно сокращается. Получить результаты можно уже через один час.
Как правильно понимать результаты ПЦР-исследования
Результат ПЦР-анализа для пациента может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный результат означает отсутствие следов враждебной ДНК и хорошее здоровье. Положительный результат, наоборот, указывает на наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни, что говорит о заражении и необходимости лечения.
Нередко ПЦР-диагностика показывает положительный результат, хотя пациент не испытывает никакого дискомфорта и не имеет признаков заболевания. Это означает, что болезнь находится в очень ранней стадии. В таких случаях необходимы дополнительные обследования и лечение. Если заболевание было диагностировано рано, то лучше начинать лечение как можно быстрее, так как чем дальше зайдет болезнь, тем труднее будет ее вылечить.
ПЦР-анализ является невероятно точным методом диагностики инфекций: он может обнаружить возбудителя болезни, даже если в собранной пробе находится всего одна молекула его ДНК. Именно это свойство делает ПЦР-диагностику одним из самых эффективных инструментов для проверки наличия инфекции и контроля за эффективностью лечения.
Фото: freepik.com